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纯化PPO粗酶溶液
发布时间:2019-08-09 点击:
葡萄糖凝胶过滤色谱法1。
葡聚糖凝胶处理,包装和平衡调整(1)柱处理称取一定量的Sephadex G-200干粉,加入非离子水或蒸馏水浸泡48小时,除去悬浮颗粒,除去悬浮颗粒。避免凝胶空气的存在会影响色谱效果。在填充凝胶之前,必须除去凝胶中的气体。在该方法中,将凝胶溶液放入滤瓶中并吸出直至其变成凝胶溶液。
(2)清洁填充柱柱并将其垂直固定在色谱柱支架上。加入1/3体积的非离子水并打开下部液体出口以平滑水流。立即在小容器中装入适当浓度的凝胶。液体(如果凝胶浓度太高,会产生气泡,影响蛋白质分离的速度。蛋白质分离效果)。当轻轻地倒入色谱柱时,凝胶会慢慢沉淀成层状。存放到列顶部。
在5-2厘米处,停止包装并切割等于柱内径的滤纸以覆盖凝胶。
色谱柱顶部连接恒流泵,底部端口连接蛋白质监测仪,直至色谱柱平衡。
(3)在装入柱色谱之前,必须平衡平衡柱。所谓的平衡是通过用色谱过程缓冲液(洗脱液)替换色谱柱中的溶液来形成色谱柱。缓冲系统与柱色谱系统一致。
该方法包括使用色谱柱顶部的恒流泵将平衡缓冲液泵入色谱柱,打开色谱柱底部的出口和平衡液的流速。它是零。
在5-1ml / min时,当流出物的pH与平衡缓冲液的pH相同时,柱达到平衡。
在该实验中,使用0。
002 MTris-HCL缓冲液PH7。
4(包括0)
0001MEDTA),平衡凝胶Sephadex G-200。
2)负载:将粗酶溶液应用于柱。
3)洗脱:使用0。
02MTris-HCL缓冲液Ph7。
4(包括0)
(001MEDTA),收集洗脱液并分析酶活性,蛋白质浓度和聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量的基本性质。
4)测量酶活性和蛋白质浓度。


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